熒光分光光度計概要

　　熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù)，從各個角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。通過對這些參數(shù)的測定， 不但可以做一般的定量分析， 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化， 從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。熒光分光光度計的激發(fā)波長掃描范圍一般是190~650nm，發(fā)射波長掃描范圍是200~800nm?？捎糜谝后w、固體樣品（如凝膠條）的光譜掃描。

?

　　熒光分光光度計分類

　　熒光光譜法具有靈敏度高、選擇性強、用樣量少、方法簡便、工作曲線線形范圍寬等優(yōu)點，可以廣泛應用于生命科學、醫(yī)學、藥學和藥理學、有機和無機化學等領(lǐng)域。

　　熒光分光光度計的發(fā)展經(jīng)歷了手控式熒光分光光度計，自動記錄式熒光分光光度計，計算機控制式熒光分光光度計。

　　光分光光度計三個階段;熒光分光光度計還可分為單光束式熒光分光光度計和雙光束式熒光分光光度計兩大系列。其他的還有低溫激光Sh p ol’skill熒光分光光度計，配有壽命和相分辯測定的熒光分光光度計等。

?

　　熒光分光光度計操作步驟

　　1.開機：接通電源，打開主機開關(guān)，點燃（打開）光源后，根據(jù)說明書要求啟動計算機。

　　2.檢測前準備：參照儀器說明書，在20天內(nèi)至少進行一次激發(fā)校準和發(fā)射校準，檢測前儀器應預熱。

　　3.工作條件的選擇：環(huán)境溫度應在20℃±5℃;相對濕度不大于70%;電源穩(wěn)定，無磁場、電場干擾。根據(jù)樣品的特性及熒光強度，選擇合適的儀器工作條件（如狹縫、PM增益、響應時間等）。

　　4.基本測定

　?。?）熒光激發(fā)光譜測定

　　設置儀器參數(shù)，掃描發(fā)射波長，找到maxλem，以此為發(fā)射波長，記錄發(fā)射強度作為激發(fā)波長的函數(shù)，便得到激發(fā)光譜。

　?。?）熒光發(fā)射光譜測定

　　設置儀器參數(shù)，掃描激發(fā)波長，找到maxλex，以此為激發(fā)波長，記錄發(fā)射強度與發(fā)射波長間的函數(shù)關(guān)系，便得到熒光發(fā)射光譜。

　　（3）差譜測定

　　設置儀器參數(shù)，選擇合適的工作方式，測定背景溶液的發(fā)射光譜并儲存起來，在一定的工作方式下，掃描樣品溶液的發(fā)射波長，得到當時的光度值和儲存的背景值之間的差示值，即差譜。

　?。?）峰面積積分

　　選擇適當?shù)墓ぷ鞣绞剑瑢悠啡芤哼M行積分操作，即得到峰面積積分。

　?。?）熒光強度

　　選擇合適的測量參數(shù)，設置λex、λem，采用定點讀數(shù)或掃描方式，即可測得所選波長處的熒光強度。

　?。?）定量測定

　　配制一系列已知濃度的標準溶液，在一定的測定條件下，設置λex、λem，按照由稀至濃的次序，測定標準溶液的熒光強度，繪制熒光強度—濃度的工作曲線，不改變儀器參數(shù)測定未知溶液的熒光強度，由工作曲線即可求出未知溶液的濃度。